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產(chǎn)品列表

PROUCTS LIST

默瑞生物提供近岸系列體外合成酶及試劑,解決mRNA疫苗的關(guān)鍵痛點(diǎn)

發(fā)布時(shí)間: 2021-06-24  點(diǎn)擊次數(shù): 2364次

  QQ截圖20210616142302.jpg

默瑞生物提供近Novoprotein近岸蛋白質(zhì)一系列mRNA體外合成酶及試劑,解決mRNA疫苗的關(guān)鍵痛點(diǎn)。所有產(chǎn)品均采用藥用規(guī)格原輔料生產(chǎn),嚴(yán)格控制宿主蛋白質(zhì)殘留、核酸殘留及常見病原體污染,符合GMP規(guī)范的產(chǎn)品生產(chǎn)與質(zhì)量管理規(guī)程,保障生產(chǎn)過程及所有原輔料可追溯。

  產(chǎn)品特點(diǎn):

  *GMP級(jí)mRNA體外合成及修飾原料,animal-free,ampicillin-free

  *產(chǎn)品生產(chǎn)、質(zhì)量控制及配套文件體系,符合mRNA疫苗及藥物研發(fā)生產(chǎn)需求

  *經(jīng)過臨床使用驗(yàn)證,單批次產(chǎn)能千萬人份,年產(chǎn)能50億人份

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  mRNA疫苗的成功需要保證mRNA的穩(wěn)定性和高效翻譯效率以及mRNA的大量生成。

  1、生成模板-質(zhì)粒線性化 相關(guān)產(chǎn)品:Bsa I,GMP Grade(貨號(hào):GMP-RE026)

  此步將構(gòu)建好的質(zhì)粒酶切,處理成線性化雙鏈DNA模板,用于下一步mRNA合成。

  限制性內(nèi)切酶Bsa I 特異性識(shí)別雙鏈DNA中位點(diǎn)并進(jìn)行酶切,可將模板質(zhì)粒酶切線性化,作為mRNA體外合成模板;

  酶切位點(diǎn):

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  產(chǎn)品特點(diǎn):

  強(qiáng)特異性

  受CpG、Dcm甲基化影響,剪切阻斷

  受EcoBI甲基化影響,剪切可能受影響

  不受Dam甲基化影響

  2、mRNA體外合成

  此步以DNA為模板,在體外由RNA聚合酶催化合成mRNA。

  T7 RNA Polymerase(T7 RNA聚合酶)是高度特異識(shí)別T7啟動(dòng)子序列的5'→3' RNA聚合酶,以含有T7啟動(dòng)子序列的單鏈或雙鏈DNA為模板,以NTP為底物,合成與啟動(dòng)子下游的單鏈DNA互補(bǔ)的RNA。T7 RNA聚合酶是體外轉(zhuǎn)錄mRNA的關(guān)鍵酶。

  產(chǎn)品特點(diǎn):

  高度特異識(shí)別T7啟動(dòng)子

  20ul反應(yīng)體系,產(chǎn)量可達(dá)150ug

  可對(duì)低至1ng模板進(jìn)行有效轉(zhuǎn)錄

  合成長(zhǎng)度可達(dá)15k

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  體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA,Qsep1結(jié)果顯示,純度高,均一性好。

  3、mRNA轉(zhuǎn)錄后修飾:加帽加尾

  此步對(duì)mRNA進(jìn)行修飾,合成功能完整的mRNA。

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  完整mRNA結(jié)構(gòu)

  3.1、mRNA加帽(Cap0)   

  此步與3.2同時(shí)進(jìn)行,在mRNA的5'端加上Cap0帽結(jié)構(gòu),再將Cap0轉(zhuǎn)化為Cap1結(jié)構(gòu)。

  在真核生物中,轉(zhuǎn)錄后的mRNA必需經(jīng)過一系列修飾才能形成完整的結(jié)構(gòu),即在5'端形成一個(gè)帽子結(jié)構(gòu)(Cap1),3’端形成PolyA尾結(jié)構(gòu)。這些結(jié)構(gòu)與mRNA的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運(yùn)和翻譯密切相關(guān)。

  Vaccinia Capping Enzyme(牛痘病毒加帽酶)用于給體外轉(zhuǎn)錄合成的mRNA催化加上帽子結(jié)構(gòu)(Cap0),顯著改善mRNA的穩(wěn)定性和翻譯能力,使mRNA可在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)蛋白,避免核酸外切酶等的降解破壞。

  mRNA的帽結(jié)構(gòu)是由一個(gè)7-甲基鳥苷通過一個(gè)5′–5′三磷酸酯橋連接到mRNA 鏈的5′核苷上組成。Cap-0結(jié)構(gòu)由相鄰的RNA鏈通過三種酶的依次反應(yīng)形成。進(jìn)一步形成cap-1結(jié)構(gòu)需要2-O甲基轉(zhuǎn)移酶(Cat. No: GMP-M072, Novoprotein)參與,該修飾可以降低RNA在體內(nèi)引起的細(xì)胞先天免疫反應(yīng)。

  產(chǎn)品特點(diǎn):

  高效完成mRNA加帽Cap0

  提高mRNA的穩(wěn)定性,防止被RNA酶降解

  提高mRNA的翻譯效率,提高蛋白產(chǎn)量

  3.2、mRNA加帽(Cap1)

  此步與3.1同時(shí)進(jìn)行,在mRNA的5'端加上Cap0帽結(jié)構(gòu),再將Cap0轉(zhuǎn)化為Cap1結(jié)構(gòu)。

  真核生物中,mRNA的轉(zhuǎn)錄后須經(jīng)系列修飾,在5'端形成一個(gè)特殊結(jié)構(gòu),即帽子結(jié)構(gòu),3’端形成PolyA尾結(jié)構(gòu)。這些結(jié)構(gòu)與mRNA的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運(yùn)和翻譯密切相關(guān)。已知Cap1結(jié)構(gòu)存在于所有真核生物mRNA,在穩(wěn)定mRNA結(jié)構(gòu)和提高翻譯效率方面起重要作用。研究表明,體外轉(zhuǎn)錄修飾得到的Cap1結(jié)構(gòu)mRNA更不容易被免疫系統(tǒng)的RNA感受器(RIG-I)識(shí)別,因此免疫刺激更低。

  mRNA Cap 2´-O-Methyltransferas (2´-O-甲基轉(zhuǎn)移酶)可利用 S-腺苷甲硫氨酸(SAM)作為甲基供體, 在 RNA 5´末端緊鄰帽結(jié)構(gòu)(Cap 0)的第一個(gè)核苷酸的 2´-O 上添加甲基基團(tuán),形成帶有 Cap 1 結(jié)構(gòu)的 mRNA。Cap1 結(jié)構(gòu)能增強(qiáng) mRNA 的翻譯效率,從而可提高轉(zhuǎn)染后 mRNA 編碼的蛋白表達(dá)水平。該酶只能以帶 7-甲基鳥苷帽結(jié)構(gòu)(m7GpppN)的 RNA 為底物,不會(huì)作用于 5´末端為pN、ppN、 pppN 或 GpppN 的 RNA。帶 7-甲基鳥苷帽結(jié)構(gòu)(m7GpppN)的 RNA 可通過 Vaccinia Capping System(Cat. No: GMP-M062, Novoprotein)來制備。

  產(chǎn)品特點(diǎn):

  使mRNA的Cap 0帽子甲基化為 Cap 1帽子

  提高 RNA 的翻譯效率,提高蛋白產(chǎn)量

  進(jìn)一步降低免疫原性

圖片4.png

  完整mRNA在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)GFP蛋白,加帽酶與帽類似物對(duì)比

  3.3、mRNA加尾(PolyA)

  此步在mRNA的3'端加上PolyA尾。

  真核生物中,mRNA的轉(zhuǎn)錄后須經(jīng)系列修飾,在5'端形成一個(gè)特殊結(jié)構(gòu),即帽子結(jié)構(gòu),3’端形成PolyA尾結(jié)構(gòu)。這些結(jié)構(gòu)與mRNA的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運(yùn)和翻譯密切相關(guān)。Poly A與成熟mRNA的穩(wěn)定性、翻譯起始以及出核運(yùn)輸有關(guān),體內(nèi)轉(zhuǎn)錄后修飾中,polyA聚合酶在RNA 3’-OH上逐一引入100-200個(gè)A堿基。

  體外轉(zhuǎn)錄RNA過程中,E. coli Poly (A) Polymerase(加尾酶) 不依賴模板的存在,可以催化 ATP 以 AMP 的形式依次摻入到 RNA 的 3´末端,即在 RNA 的 3´末端加多聚 A 尾。Poly (A) 聚合酶具有很高的加尾效率,可以在 RNA 的 3´末端加入 20~200 個(gè) A 堿基。 還原體內(nèi)加尾過程。

  產(chǎn)品特點(diǎn):

  穩(wěn)定mRNA的存在形式

  引導(dǎo)轉(zhuǎn)錄終止

  提高RNA在真核細(xì)胞中的翻譯效率

  4、其他相關(guān)產(chǎn)品

  4.1、防止mRNA降解

  在流程2-3 mRNA合成與修飾中加入RNase Inhibitor,防止RNA降解。

  RNase Inhibitor可與RNase A形成1:1復(fù)合體,對(duì)RNase 有*非競(jìng)爭(zhēng)性抑制,保護(hù)mRNA轉(zhuǎn)錄后不被降解

  產(chǎn)品特點(diǎn):

  強(qiáng)抑制RNase活性

  穩(wěn)定性強(qiáng)

  4.2、降解模板DNA

  在流程2 RNA合成結(jié)束后,去除模板DNA。

  DNase I將單鏈或雙鏈DNA隨機(jī)分解。

圖片5.png

  DNase I 去除RNA樣本種的DNA殘留

  4.3、增加mRNA產(chǎn)量

  在流程2 RNA合成過程中加入無機(jī)焦linsuan酶,增加RNA產(chǎn)量。

  無機(jī)焦linsuan酶PPase(Pyrophosphatase, Inorganic)可催化無機(jī)焦linsuan鹽水解生成正linsuan鹽(P2O7-4+H2O+PPase→2HPO4-2),一方面可去除無機(jī)焦linsuan鹽對(duì)反應(yīng)體系的抑制,另一方面為反應(yīng)提供熱力學(xué)動(dòng)力,促進(jìn)產(chǎn)物的生成。常用于RNA、DNA、蛋白質(zhì)的生物合成中,是一種良好的輔劑,在mRNA疫苗體外大規(guī)模合成中加入可顯著提高產(chǎn)量。

圖片6.png

  無機(jī)焦磷酸酶去除mRNA合成過程中產(chǎn)生的焦磷酸,提高mRNA產(chǎn)量

  相關(guān)清單

  

圖片7.png

默瑞(上海)生物科技有限公司,作為專業(yè)的生命科學(xué)產(chǎn)品推廣與服務(wù)商,以“創(chuàng)新,專業(yè),共贏”的理念,不斷強(qiáng)化服務(wù)體系,提升客戶體驗(yàn),結(jié)合國(guó)內(nèi)外優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品提供高標(biāo)準(zhǔn)完整解決方案,幫助科研客戶和生物技術(shù)企業(yè)高效創(chuàng)新,加速轉(zhuǎn)化,創(chuàng)造更多優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品,提升社會(huì)福祉,實(shí)現(xiàn)多方共贏。

默瑞生物創(chuàng)立以來,已經(jīng)陸續(xù)導(dǎo)入TwistDx,BACPAC,博日,Celexplorer

DiscoverX,Canvax,Jackson,izon,Biontex,Immunostep,101Bio,enzymatics,AATBioquest,KAPABIOSYSTEMS,BioDynami,Echelon,ChromoTek,Nanocs,Biotechrabbit,LeeBiosolutions, Novoprotein,magtivio等優(yōu)質(zhì)國(guó)際品牌,逐步培育成為專業(yè)用戶的選擇。

 

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